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分光光度计是通过分光光度法对物质进行定量和定性分析的仪器。分光光度法的原理是通过测量待测物质在特定波长或特定波长范围内的光吸收,对物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为:
(1)200~400nm的紫外区,
(2)400~760nm的可见区,
(3)2.5~25μM(根据波数为4000cm-1~400cm-1)。使用的仪器有紫外分光光度计、可见分光光度计(或色度计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为确保测量的精度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录进行定期校准。当单色光辐射通过待测物质溶液时,物质吸收的量与物质浓度和液体层厚度(光程长度)成正比,关系如下:1A=对数-=eclt,其中a为吸收度;T为透光率;E为吸收系数,用(E1%1cm)表示,即将吸收率换算成溶液浓度1%(g/ml)和液层厚度1cm的值,盐雾试验箱;C为100ml溶液中受试物的重量,G(按干品或无水物质计算);L是液体层的厚度,cm,烘箱。物质对光的选择性吸收波长和相应的吸收系数是物质的物理常数。当已知某一纯物质在一定条件下的吸收系数时,可在相同条件下将受试物质配制成溶液,并可测量其吸收。试验物质中物质的含量可根据上述公式计算。
在可见光区域,除部分物质吸收光外,许多物质本身不吸收,但在一定条件下加入显色剂或经处理后即可测定,故又称比色分析。由于显色过程中影响颜色深度的因素很多,且常使用单色光纯度较差的仪器,因此应使用标准品或对照品进行同时测量。分光光度计已成为现代分子生物学实验室的常规仪器。它通常用于定量核酸、蛋白质和细菌生长浓度