胶体金探针的质量鉴定

1。金颗粒的大小及均匀度
用有Formvar支持膜的镍网蘸取金标记试剂，空气干燥后，透射电镜下观察金颗粒的大小及均匀度，计算平均直径，如电镜放大倍数10万，照片放大为2．5倍，100000×2．5＝250000＝25nm。空气中干燥后乙酸铀负染，在透射电镜下观察，可见金颗粒周围有一明显的空晕，表示颗粒表面吸附着蛋白质分子。

支持膜（火棉胶膜）的制备；50mil5％的火棉胶+50mi乙酸戊酯，戊酯火棉胶。

2。用免疫细胞化学滤纸模型鉴定免疫金制剂的特异性和敏感性制得2．5％的乙酸
在WhatmamI号滤纸条上滴加2//l的抗原溶液（含抗原量分别为1ug、l00ng、10ng、3ng和lng），干燥后，纸条在甲醛蒸气中固定。加适当稀释的抗体作用1h，用TBS（0．05mol/LpH7．4Tris缓冲液，含．15mol/LNaCl），1％Triton X-l00洗3次，每次10rain。随后，纸条再用洗脱SephacrylS-400柱的相同洗脱缓冲液洗lOmin，再滴加不同稀释度的金标探针孵育1h。纸条再用TBS-Triton缓冲液洗3次，每次10rain。用TBS（不含TritonX—100）洗10min。再用双蒸水洗3次各5min。用银显影液显影30—40min。用双蒸水洗终止显影。

也可用下法试验金探针：将系列稀释的1：100、1；200、l；500、1：1000和l：10000的正常兔血清2/11分别滴加在滤纸条上，然后用甲醛蒸气固定，纸片再用适当稀释的羊抗兔IgG金探针在室温中孵育1h，洗涤，再按上述方法用银显影。这方法可以初步测定金探针的质量，也可用于一些抗原分析研究。